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            首頁/ 技術支持/ 2020年版《中國藥典》四部 2351 真菌毒素測定法 產品配置方案

            2020年版《中國藥典》四部 2351 真菌毒素測定法 產品配置方案

            2021-03-16

            ? ? ? ? 真菌毒素是真菌在食品或飼料里生長所產生的代謝產物,對人類和動物都有害。中藥材從種植、采集、制備、加工、儲藏、流通的全過程周期較長且復雜,如條件控制不當,各環節均可能產生真菌毒素。研究發現,中藥材可被多種真菌侵染,產生的毒素包括多種真菌毒素,如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏馬菌素和玉米赤霉烯酮等。因此,全方位加強中藥材中真菌毒素污染水平監控成為 2020 版《中國藥典》的重中之重。

            ? ? ? ? 2020 版《中國藥典》四部 2351 真菌毒素測定法,按照真菌毒素種類(黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素 A、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏馬毒素 B1、B2 及 T-2 毒素)分別制定了相應的供試品前處理方法及凈化步驟,增添了多種真菌毒素測定法。迪馬科技根據2351通則要求,整理出對應產品配置方案,從標準品、樣品前處理產品、色譜分析色譜柱、通用消耗品等方面為您進行中藥材中真菌毒素檢測提供全面技術支持。

            ―、黃曲霉毒素測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            黃曲霉毒素B1 [1162-65-8]

            2 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047100AL-2

            黃曲霉毒素B2 [7220-81-7]

            0.5 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047200AL-0.5

            黃曲霉毒素G1 [1165-39-5]

            2 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047400AL-2

            黃曲霉毒素G2 [7241-98-7]

            0.5 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047500AL-0.5

            樣品前處理

            黃曲霉毒素總量免疫親和柱

            ProElut AFB&G IAC 3 mL 20/pk

            67104

            色譜分析

            第一法(液相色譜法)

            • 碘衍生法 ②光化學衍生法

            Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm

            99601

            第二法(液相色譜-串聯質譜法)

            Leapsil C18 100 x 2.1mm, 2.7 μm

            86005

            ?

            二、赭曲霉毒素A測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            赭曲霉毒素A [303-47-9]

            10 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A15670000AL-10

            樣品前處理

            赭曲霉毒素A免疫親和柱

            ProElut OTA IAC 3 mL 20/pk

            67112

            色譜分析

            第一法(液相色譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm

            99601

            第二法(液相色譜-串聯質譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm

            99613

            Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm

            81013

            ?

            三、玉米赤霉烯酮測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            玉米赤霉烯酮[17924-92-4]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A17947400AL-100

            樣品前處理

            玉米赤霉烯酮免疫親和柱

            ProElut ZEA IAC 3 mL 20/pk

            67110

            色譜分析

            第一法(液相色譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm

            99601

            第二法(液相色譜-串聯質譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm

            99613

            Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm

            81013

            ?

            四、嘔吐毒素測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            嘔吐毒素[51481-10-8]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A12147000AL-100

            樣品前處理

            嘔吐毒素免疫親和柱

            ProElut DON IAC 3 mL 20/pk

            67100

            色譜分析

            第一法(液相色譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm, 5 μm

            99601

            第二法(液相色譜-串聯質譜法)

            Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm

            99613

            Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm

            81013

            ?

            五、展青霉素測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            展青霉素[149-29-1]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A15896000AL-100

            樣品前處理

            展青霉素多功能凈化柱

            ProElut PAT MFC 5 mL 25/pk

            67120

            色譜分析

            液相色譜-串聯質譜法

            Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm

            99613

            Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm

            81013

            ?

            六、多種真菌毒素測定法

            ?

            真菌毒素

            產品描述

            貨號

            標準品

            黃曲霉毒素B1 [1162-65-8]

            2 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047100AL-2

            黃曲霉毒素B2 [7220-81-7]

            0.5 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047200AL-0.5

            黃曲霉毒素G1 [1165-39-5]

            2 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047400AL-2

            黃曲霉毒素G2 [7241-98-7]

            0.5 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A10047500AL-0.5

            伏馬毒素B1[116355-83-0]

            50 μg/mL 乙腈: 水(1:1) 1 mL

            DRE-A13955900WL-50

            伏馬毒素B2[116355-84-1]

            50 μg/mL 乙腈: 水(1:1) 1 mL

            DRE-A13955905WL-50

            T-2 毒素[21259-20-1]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A13989000AL-100

            赭曲霉毒素A [303-47-9]

            10 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A15670000AL-10

            嘔吐毒素[51481-10-8]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A12147000AL-100

            玉米赤霉烯酮[17924-92-4]

            100 μg/mL 乙腈 1 mL

            DRE-A17947400AL-100

            樣品前處理

            HLB柱

            ProElut PLS 60mg / 3mL 50/pk

            68003

            色譜分析

            液相色譜-串聯質譜法

            Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm, 3 μm

            99613

            Inspire C18 150 x 2.1 mm, 3 μm

            81013

            ?

            通用消耗品

            名稱

            規格

            貨號

            HPLC溶劑?緩沖鹽

            甲醇 HPLC級

            4 L

            50102

            乙腈 HPLC級

            4 L

            50101

            甲酸 HPLC級

            50 mL

            50144

            乙酸 HPLC級

            50 mL

            50132

            通用色譜產品

            FitMax針頭式過濾器 PTFE

            13 mm, 0.22 μm 100/pk

            30043

            FitMax針頭式過濾器 Nylon

            13 mm, 0.22 μm 100/pk

            30039

            樣品瓶(棕色/螺紋)

            2 mL, 100/pk

            1034

            樣品瓶蓋/含墊(已經組裝)

            100/pk

            1035

            瓶架/白色/藍色

            50孔

            52401A/52401B

            HPLC 進樣針

            25 μL

            H80465

            GC 進樣針

            5 μL

            H87900

            紅色貨號產品促銷ing……

            陳皮中的黃曲霉毒素總量的測定


            適用范圍
            ? ? ? ? 適用于陳皮中的黃曲霉毒素總量的檢測。


            樣品前處理
            ? ? ? ? 準確稱取5.00 g樣品到50 mL離心管,添加1 g氯化鈉,量取25 mL 70%甲醇水溶液,混勻振蕩3 min,4000 r/min離心,移取上清液10 mL至另一試管中,加入3 mL正己烷,旋渦混勻3 min,4000 r/min離心,去除上層正己烷與兩相處的雜質,取下層提取液5 mL,加入20 mL PBS*溶液進行稀釋,稀釋混勻后,稀釋液用玻璃纖維濾紙過濾,取濾液25 mL (1 g)過黃曲霉毒素總量免疫親和柱 ProElut AFB&G IAC 3 mL(Cat.# 67104),溶液以1-2 滴/秒過柱,過完后,加入10 mL PBST**溶液洗柱,再加入10 mL一級水進行洗柱,清除柱子殘留水滴(用氣體緩吹或輕輕甩干,勿用氣流倒吸柱子),用1 mL甲醇洗脫,0.45 μm濾頭過濾,待測。


            *PBS溶液: 0.62 g磷酸二氫鈉,5.73 g磷酸氫二鈉,9 g氯化鈉,1000 mL一級水定容;
            **PBST溶液: 0.31 g磷酸二氫鈉,2.87 g磷酸氫二鈉,9 g氯化鈉,1000 mL一級水定容,加入0.5 mL吐溫20達到0.05%。


            色譜條件
            色譜柱:Diamonsil C18(2), 150 x 4.6 mm, 5 μm(Cat.# 99601)
            流動相:45%甲醇水溶液
            流? 速:1.0 mL/min
            柱溫度:35 ℃
            進樣量:20 μL
            檢測器:熒光檢測器,激發波長360 nm,發射波長440 nm
            衍生器:光化學柱后衍生器

            ?


            添加回收結果

            樣品

            檢測結果(μg/kg)

            回收率(%)

            陳皮

            4.18

            88.7

            陳皮(添加10 μg/kg)

            13.05

            ?

            免疫親和層析凈化高效液相色譜法檢測中藥薏苡仁中的玉米赤霉烯酮

            適用范圍

            ? ? ? ? 適用于中藥薏苡仁中的玉米赤霉烯酮的檢測。

            ?

            樣品提取

            ? ? ? ? 稱取2份各2.0000 g 樣品(誤差小于0.001) 到50 mL 離心管,加入0.4 g 氯化鈉,其中1 份加標100 ppb,量取10 mL 90%乙腈水溶液,超聲提取30 min,劇烈震蕩10 min,4000 r/min 離心5 min,取上清液用PBS 稀釋5倍,玻璃纖維濾紙過濾,置濾液于50 mL 離心管中待用。

            ?

            樣品凈化

            ? ? ? ? 取濾液25 mL(1 g),以1 秒/滴的流速分別通過免疫親和柱ProElut ZEA IAC 3 mL(Cat.No: 67110),直至空氣進入免疫親和柱中,用10 mL 水淋洗免疫親和柱,棄去全部濾液,吹干柱子。準確加入1 mL 甲醇到免疫親和柱進行洗脫,流速約為1 滴/秒,收集全部洗脫液到干凈的試管中50 ℃氮氣吹干,流動相復溶,過0.45 μm 濾膜,待檢測。

            * PBS:1.2 g 磷酸氫二鈉(或2.92 g 十二水合磷酸氫二鈉),8 g 氯化鈉,0.2 g 磷酸二氫鉀,0.2 g 氯化鉀,1000 mL 一級水定容,混勻;

            ?

            色譜條件

            色譜柱:Diamonsil C18(2), 150 x 4.6 mm, 5 μm (Cat.No.: 99601)

            流動相:甲醇:乙腈:水= 8:46:46

            流速:1.0 mL/min

            柱溫:35 ℃

            進樣量: 20 μL

            檢測波長:激發波長274 nm???? 發射波長440 nm

            ?

            標準品譜圖

            ?

            峰號

            化合物名稱

            保留時間(min)

            峰面積

            峰高

            濃度(ng/mL)

            1

            玉米赤霉烯酮

            8.051

            144524

            10083

            1000.00

            總計

            ?

            ?

            144524

            10083

            ?

            ?

            薏苡仁樣品譜圖

            ?

            峰號

            化合物名稱

            保留時間(min)

            峰面積

            峰高

            濃度(ng/mL)

            1

            1.440

            205163

            25195

            0.000

            2

            玉米赤霉烯酮

            8.030

            5224

            375

            36.146

            總計

            ?

            ?

            210387

            25571

            ?

            ?

            薏苡仁樣品添加100 ppb 譜圖

            ?

            峰號

            化合物名稱

            保留時間(min)

            峰面積

            峰高

            濃度(ng/mL)

            1

            1.451

            91646

            12962

            0.000

            2

            玉米赤霉烯酮

            8.017

            19792

            1456

            136.945

            總計

            ?

            ?

            111438

            14418

            ?

            ?

            添加回收結果

            樣品

            檢測結果(μg/mL)

            回收率(%)

            薏苡仁樣品

            36.146

            /

            薏苡仁添加(100 ppb)

            136.945

            101

            ?

            ?

            ?

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